Chi tiết| Tên | THIẾT KẾCÁC VECTOR BIỂU HIỆN MANG cDNA MÃ HÓA CHẤT HOẠT HÓA PLASMINOGEN MÔ CỦA NGƯỜI (h-tPA) |
| Lĩnh vực | Sinh học |
| Tác giả | Trần ThịNgọc Diệp, Hoàng Phú Hiệp, Nguyễn Hải Hà, Lê ThịThu Hiền, Nông Văn Hải |
| Nhà xuất bản / Tạp chí | Tập 6 Số 1 Năm 2008 |
| Số hiệu ISSN/ISBN | |
| Tóm tắt nội dung | |
Chất hoạt hóa plasminogen mô của người (human tissue plasminogen activator, h-tPA) là một
protein thuộc họserine protease đóng vai trò rất quan trọng trong quá trình làm tan huyết khối trong
mạch máu. Protein h-tPA đã được nghiên cứu biểu hiện trên quy mô công nghiệp ởnhiều nước phát triển
đểsản xuất dược phẩm sinh học có giá trịtrong điều trịcác bệnh tim mạch liên quan đến huyết khối. Tuy
nhiên, ởViệt Nam cho đến nay chưa có một công bốnào vềnghiên cứu sản xuất h-tPA tái tổhợp. Sử
dụng nguồn nguyên liệu ban đầu là vector pUC18 chứa cDNA mã hóa protein h-tPA, chúng tôi đã thiết
kếcác cặp mồi với các điểm cắt thích hợp và PCR nhân được đoạn cDNA mã hóa h-tPA với kích thước
khoảng 1,7 kb. Các sản phẩm PCR nhân lên đã được tạo dòng trong các vector pGEX6p1và pET21a(+),
biểu hiện ởtếbào vi khuẩn Escherichia coli, và vector pcDNA3, biểu hiện trong tếbào động vật có vú
nuôi cấy. Vector tái tổhợp pGEX6p1/ h-tPA và vector pET21a(+)/ h-tPA tương ứng sẽtạo ra protein tái
tổhợp h-tPA mang đoạn peptide GST (Glutathione S-Transferase) đầu amino và protein h-tPA mang 6
histidine đầu carboxyl; vector pcDNA3/ h-tPA sẽtạo ra h-tPA có kích thước phân tửvà cấu trúc gần với
protein tựnhiên nhất. Các vector mang cấu trúc biểu hiện h-tPA đang được đưa vào tếbào vật chủthích
hợp nhằm nghiên cứu biểu hiện và xác định hoạt tính của protein tái tổhợp.
Chất hoạt hóa plasminogen mô của người (human tissue plasminogen activator, h-tPA) là một protein thuộc họserine protease đóng vai trò rất quan trọng trong quá trình làm tan huyết khối trong mạch máu. Protein h-tPA đã được nghiên cứu biểu hiện trên quy mô công nghiệp ởnhiều nước phát triển đểsản xuất dược phẩm sinh học có giá trịtrong điều trịcác bệnh tim mạch liên quan đến huyết khối. Tuy nhiên, ởViệt Nam cho đến nay chưa có một công bốnào vềnghiên cứu sản xuất h-tPA tái tổhợp. Sửdụng nguồn nguyên liệu ban đầu là vector pUC18 chứa cDNA mã hóa protein h-tPA, chúng tôi đã thiết kếcác cặp mồi với các điểm cắt thích hợp và PCR nhân được đoạn cDNA mã hóa h-tPA với kích thước khoảng 1,7 kb. Các sản phẩm PCR nhân lên đã được tạo dòng trong các vector pGEX6p1và pET21a(+), biểu hiện ởtếbào vi khuẩn Escherichia coli, và vector pcDNA3, biểu hiện trong tếbào động vật có vú nuôi cấy. Vector tái tổhợp pGEX6p1/ h-tPA và vector pET21a(+)/ h-tPA tương ứng sẽtạo ra protein tái tổhợp h-tPA mang đoạn peptide GST (Glutathione S-Transferase) đầu amino và protein h-tPA mang 6 histidine đầu carboxyl; vector pcDNA3/ h-tPA sẽtạo ra h-tPA có kích thước phân tửvà cấu trúc gần với protein tựnhiên nhất. Các vector mang cấu trúc biểu hiện h-tPA đang được đưa vào tếbào vật chủthích hợp nhằm nghiên cứu biểu hiện và xác định hoạt tính của protein tái tổhợp. |
|
